Programa Doutoral em Metabolismo - Clínica e Experimentação

Objetivos
Proporcionar conhecimentos teóricos e práticos básicos sobre cultura de células animais. Serão fornecidos conhecimentos teóricos sobre as culturas de células, suas características, condições da cultura (ambiente, laboratório), a biologia das células em cultura, técnicas de cultura celular e procedimentos básicos com as culturas celulares (técnicas de trabalho em condições assépticas, manutenção e propagação das culturas, transfeção de células em cultura). Serão ainda transmitidos conhecimentos práticos indispensáveis para a cultura de células animais: como manter um laboratório de cultura de células funcional, como resolver alguns dos problemas frequentemente encontrados num laboratório de cultura de células, etc. Os estudantes terão ainda oportunidade de exercitar gestos técnicos: preparação de meio de cultura, manutenção e propagação de uma cultura celular, observação de células ao microscópio, contagem de células, análise da viabilidade celular, quantificação de proteínas celulares.

Conteúdo programático do ensino teórico:
- Culturas de células animais: características, vantagens e desvantagens. Biologia das células em cultura. Clonagem de células. Transformação das células em cultura.
- Culturas celulares aderentes e em suspensão. Fases da adesão celular. Escolha e tipo de substratos. Co-culturas. Engenharia dos tecidos. Matrizes e escolha dos materiais. Fatores de crescimento.
- Criopreservação. Processos celulares durante a congelação. Fatores determinantes para uma criopreservação eficaz. Exemplos de protocolos de congelação e descongelação de culturas celulares.
- Diferenciação celular. Marcadores celulares de diferenciação. Indutores de diferenciação. Testes de quantificação celular. Fases do ciclo de crescimento celular. Testes de Viabilidade Celular. Vantagens e Desvantagens.
- O ambiente de cultura celular.
- O laboratório de cultura celular.
- A contaminação das células em cultura.
- Técnicas de cultura celular.
- Transfeção de células em cultura.
- Procedimentos básicos com as culturas celulares.


Conteúdo programático do ensino prático:
- Técnicas de trabalho em condições assépticas, incluindo esterilização de material.
- Preparação de meio de cultura.
- Observação de células no microscópio invertido.
- Tripsinização, congelação e descongelação de células.
- Mudança de meio e realização de subcultura.
- Doseamento de proteínas celulares pelo método de Bradford.
- Contagem de células.
- Determinação da viabilidade por 2 métodos distintos: azul de tripano e método MTT.


Competências e resultados da aprendizagem:

Para quem vai iniciar investigação utilizando esta técnica laboratorial, permite a aquisição de conhecimentos teóricos básicos sobre culturas de células.

Também permite o aprofundamento de conhecimento existente sobre a cultura de células, de modo a tornar a realização desta técnica mais segura e eficiente.

Permite a aquisição de experiência prática com culturas de células, relativamente a procedimentos básicos como preparação de meio de cultura, manutenção da cultura e subcultura, determinação da viabilidade celular.

Frequência da UC:
Aprovação quando o total de faltas não excede 25% do total de carga letiva; necessária a frequência ao total da componente prática.

Avaliação:
A classificação final na UC é obtida pela média ponderada da avaliação contínua obtida ao longo da parte prática da UC (25% do total da nota final) e da avaliação obtida no exame escrito (75% do total da nota final). Exame escrito a realizar após término da UC, em data a definir.